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品名：EnzyFluo™AMPK磷酸化測(cè)定試劑盒
貨號(hào)： EAMPK-100
品牌：Bioassay Systems
規(guī)格：100次測(cè)試/kit

應(yīng)用：
用于定量熒光免疫酶法測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞中AMPK的磷酸化狀態(tài)。

主要特征
敏感的。只需500個(gè)細(xì)胞/孔即可測(cè)量pAMPK調(diào)制。
簡(jiǎn)便。無(wú)需細(xì)胞裂解，細(xì)胞可以培養(yǎng)數(shù)天。

方法
FL360 / 450nm，530 / 585nm

樣品
細(xì)胞

物種
人，小鼠，大鼠

尺寸
100次測(cè)試

保質(zhì)期
6個(gè)月

更多細(xì)節(jié)
5-AMP活化蛋白激酶（AMPK）是細(xì)胞內(nèi)能量平衡的關(guān)鍵傳感器。AMPK響應(yīng)于AMP / ATP比率的增加而被激活，這可能是由許多因素引起的，例如肌肉收縮，饑餓或缺氧。AMPK是異源三聚體蛋白復(fù)合物，包含α-（63 kDa），β-（38 kDa）和γ-（38 kDa）亞基。對(duì)于每個(gè)亞基，已鑒定出同種型（α1，α2，β-1，β-2，γ1，γ2，γ3），這些同型異構(gòu)體理論上允許形成12種不同的蛋白質(zhì)。α亞基含有Ser/Thr激酶結(jié)構(gòu)域，而調(diào)節(jié)亞基含有AMP和ATP以及糖原的結(jié)合位點(diǎn)。AMPK在催化域內(nèi)通過(guò)Thr-172上的磷酸化被激活。與基礎(chǔ)水平相比，AMP結(jié)合導(dǎo)致AMPK活性提高2至5倍。
BioAssay Systems基于細(xì)胞的ELISA可測(cè)量全細(xì)胞中磷酸化的AMPK，并將信號(hào)歸一化至總蛋白質(zhì)含量。該抗體可識(shí)別兩個(gè)α亞基，因此可用于所有組織（人，小鼠，大鼠）的細(xì)胞。這種簡(jiǎn)單而有效的測(cè)定方法消除了細(xì)胞裂解液制備的需要，可用于短期和長(zhǎng)期測(cè)定中的AMPK調(diào)控研究。在該測(cè)定中，將在96孔板中生長(zhǎng)的細(xì)胞固定并在孔中通透。使用熒光ELISA測(cè)量AMPK磷酸化（pAMPK），然后在每個(gè)孔中測(cè)量總蛋白。