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助力于單細(xì)胞全基因組研究的picoplex技術(shù)產(chǎn)品介紹
瀏覽次數(shù):1發(fā)布日期:2020-10-27
     

「當(dāng)您做單細(xì)胞全基因組研究時(shí)」

獲得高覆蓋度高保真性的全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物是準(zhǔn)確全面的測(cè)序結(jié)果的保障。為了保證基因組高覆蓋度無(wú)偏好性的擴(kuò)增,在單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)誕生的近二十年時(shí)間里,全基因組擴(kuò)增技術(shù)經(jīng)歷了幾次重大的變革,WGA主要有三種方式:DOP-PCR,MDA,MALBAC。

DOP-PCR

技術(shù)原理:簡(jiǎn)并寡核苷酸引物PCR,引物的3' 含6bp的隨機(jī)序列,可以隨機(jī)的和基因組DNA結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)全基因組的擴(kuò)增。

應(yīng)用范圍:因?yàn)镻CR的指數(shù)擴(kuò)增特性,放大了基因組上不同序列之間的差異,因而導(dǎo)致擴(kuò)增出的基因組覆蓋度較低。盡管如此,在1M bin size的水平上,DOP-PCR適合對(duì)染色體的CNV進(jìn)行定量。

MDA

技術(shù)原理:2001年由Laskin團(tuán)隊(duì)發(fā)明,使用隨機(jī)的六聚體引物和φ29DNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng),該聚合酶具有很強(qiáng)的鏈置換特性,能夠在等溫的條件下,擴(kuò)增產(chǎn)生50~100kb的DNA片段。同時(shí)由于其3’-5’核酸外切酶活性和校對(duì)活性,φ29 DNA聚合酶具有很高的復(fù)制保真性[2]。

應(yīng)用范圍:MDA法比DOP-PCR擁有更高的基因組覆蓋度,φ29 DNA聚合酶的高效率及高保真性,使得MDA法在對(duì)SNV的分析,以及構(gòu)建大片段文庫(kù)上有著顯著優(yōu)勢(shì)。但是,和DOP-PCR相同,MDA法依然是指數(shù)擴(kuò)增,因此依然存在PCR反應(yīng)的序列偏好性,然而,和DOP-PCR不同的是,這種偏好性并不能重復(fù),因此MDA法不適合進(jìn)行CNV的分析。

MALBAC

技術(shù)原理:2012年由謝曉亮團(tuán)隊(duì)發(fā)明,擬線性的擴(kuò)增過(guò)程降低了指數(shù)擴(kuò)增的序列偏好性。擴(kuò)增引物的5’含有27bp的共同序列,3’是8bp的隨機(jī)序列,可以和模板在15~20℃的低溫下結(jié)合,經(jīng)過(guò)8~12個(gè)循環(huán)的擬線性擴(kuò)增后,再對(duì)這些環(huán)狀的擴(kuò)增子進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增[3]。

應(yīng)用范圍:MALBAC法的優(yōu)勢(shì)在于,雖然它依然存在一定的序列偏好性,但和MDA不同,MALBAC的這種偏好性在不同的細(xì)胞之間是可重復(fù)的,因此可以通過(guò)對(duì)參考細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化后,進(jìn)行CNV的分析;另外,由于其擴(kuò)增的均一性,MALBAC法擴(kuò)增的等位基因敲除率更低。MALBAC的弱點(diǎn)在于,它使用的聚合酶保真性不如φ29,因此MALBAC在檢測(cè)SNV時(shí)將會(huì)出現(xiàn)更多的假陽(yáng)性;另外,由于它可重復(fù)性的序列偏好性,基因組上低擴(kuò)增的區(qū)域有時(shí)會(huì)在擴(kuò)增過(guò)程中丟失。

單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增:PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3
對(duì)于單細(xì)胞全基因組的研究,僅含有皮克級(jí)DNA的單細(xì)胞來(lái)說(shuō),量少而難以直接進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建。因此需要先對(duì)單細(xì)胞中的DNA進(jìn)行高質(zhì)量的擴(kuò)增。采用“隨機(jī)引物引發(fā)線性擴(kuò)增”+“發(fā)夾結(jié)構(gòu)”在2.5小時(shí)內(nèi),僅需三步即可實(shí)現(xiàn)高再現(xiàn)性的全基因組擴(kuò)增。作為PicoPLEX WGA Kit系列中的全新一代產(chǎn)品,PicoPLEX WGA Kit v3進(jìn)一步優(yōu)化了DNA聚合酶、擴(kuò)增引物、操作流程,擁有更好的CNV檢測(cè)分辨率,同時(shí)具備 高效的SNV檢測(cè)能力,滿足不同檢測(cè)需求。PicoPLEX WGA Kit系列產(chǎn)品在全球被IVF行業(yè)供應(yīng)商信賴,并用于胚胎植入前遺傳學(xué)篩查和診斷(PGS/PGD)。
流程示意圖


單細(xì)胞DNA文庫(kù)構(gòu)建:PicoPLEX? Gold Single Cell DNA-Seq  Kit(index 需單獨(dú)購(gòu)買)

由于NGS技術(shù)的迅速發(fā)展,使得對(duì)單細(xì)胞全基因組研究更為廣泛和成熟。不過(guò)目前對(duì)于單細(xì)胞全基因組的文庫(kù)構(gòu)建,更多的方法是先進(jìn)行單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增,再進(jìn)行DNA文庫(kù)構(gòu)建兩步走的方式,整個(gè)操作復(fù)雜,稍有不慎就很可能需要重頭再來(lái),讓人頭痛不已。,這款試劑盒將單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增和DNA文庫(kù)構(gòu)建兩步整合在一起,只需四步三小時(shí),便可完成單細(xì)胞到全基因組測(cè)序文庫(kù)的華麗變身! 

產(chǎn)品信息如下:

品牌 貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品規(guī)格
TAKARA R300671 SMARTer PicoPLEX? Single Cell WGA Kit 24 Rxns
TAKARA R300672 SMARTer PicoPLEX? Single Cell WGA Kit 96 Rxns
TAKARA R300673 SMARTer PicoPLEX? Single Cell WGA Kit 480 Rxns
TAKARA R300718 PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3              24 Rxns
TAKARA R300722 PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3              96 Rxns
TAKARA R300723 PicoPLEX Single Cell WGA Kit v3              480 Rxns
TAKARA R300381 PicoPLEX DNA-seq Kit                                 48 Rxns
TAKARA R300669 SMARTer PicoPLEX? Gold Single Cell DNA-seq Kit  24 Rxns
TAKARA R300670 SMARTer PicoPLEX? Gold Single Cell DNA-seq Kit  96 Rxns
TAKARA R300698 SMARTer PicoPLEX? Gold Single Cell DNA-Seq Kit 384 Rxns
TAKARA R400660 SMARTer DNA HT Dual Index Kit - 96N Set A 96
TAKARA R400661 SMARTer DNA HT Dual Index Kit - 96N Set B 96
TAKARA R400662 SMARTer DNA HT Dual Index Kit - 96N Set C 96
TAKARA R400663 SMARTer DNA HT Dual Index Kit - 96N Set D 96
TAKARA R400664 SMARTer DNA HT Dual Index Kit - 24N 48
TAKARA R400665 SMARTer DNA Unique Dual Index Kit - 24U Set A 48
TAKARA R400666 SMARTer DNA Unique Dual Index Kit - 24U Set B 48
TAKARA R400667 SMARTer DNA Unique Dual Index Kit - 24U Set C 48
TAKARA R400668 SMARTer DNA Unique Dual Index Kit - 24U Set D 48


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