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| 產(chǎn)地 | 中國(guó) |
| 品牌 | 華雅干細(xì)胞 |
| 貨號(hào) | E8725F |
| 用途 | MSC細(xì)胞培養(yǎng) |
| 包裝規(guī)格 | 450+50mL/套 |
| 純度 | % |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
產(chǎn)品組份：本產(chǎn)品包括以下8種明確公開組份：
DMEM/F12 base Essential GFs
Glutamine Transferrin
NaHCO3 Albumin
Selenium Insulin
脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離：
1. 人脂肪組織來(lái)自脂肪抽吸患者的廢棄脂肪組織。
2. 無(wú)菌PBS反復(fù)漂洗除菌。
3. 將脂肪組織轉(zhuǎn)移至50mL或250mL離心管，加入等體積的使用alpha-MEM配制的膠原酶溶液，使其終濃度達(dá)到0.1%（重量/體積）。
4. 37℃，搖床（120rpm）消化2小時(shí)以上。
5. 室溫靜置10分鐘，吸除上層油滴。
6. 離心，800g，10分鐘，收集消化細(xì)胞。
7. PBS洗滌一次，500g，10分鐘。MSCs無(wú)血清完全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞。
8. 計(jì)細(xì)胞數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度，按照5～10×105/cm2底面積接種。
9. 次日觀察，如無(wú)污染，繼續(xù)培養(yǎng)至培養(yǎng)基顏色變黃，或貼壁細(xì)胞密度達(dá)到30%以上。補(bǔ)充新鮮的MSC無(wú)血清完全培養(yǎng)基。
10. 細(xì)胞密度達(dá)到80%左右時(shí)，按照以下步驟傳代培養(yǎng)。
間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代：
1. 吸去培養(yǎng)液。
2. 用1×PBS洗滌細(xì)胞2次，以去除殘留的培養(yǎng)液。
3. 加入PBS，之后加入0.25％Trypsin-0.1%EDTA，PBS與胰蛋白酶體積比為4:1，兩者總量以覆蓋培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶表面為宜。輕輕旋轉(zhuǎn)，置37℃培養(yǎng)箱中消化3～5分鐘。用手輕拍培養(yǎng)器皿的壁，顯微鏡下可見絕大部分細(xì)胞變圓，極少量細(xì)胞貼壁仍呈紡錘形，極少量細(xì)胞已經(jīng)懸浮即可終止消化。依據(jù)不同批次胰蛋白酶活性不同，消化的時(shí)間以顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓為準(zhǔn)，但是，推薦消化時(shí)間不低于3分鐘。
4. 立即加入等體積的間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)液，用吸管吸取液體，反復(fù)吹打培養(yǎng)器皿底壁，使細(xì)胞 脫離瓶皿底壁。
5. 離心（250g，5分鐘），吸去上清液。
6. 用2～3mL間充質(zhì)干細(xì)胞的完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
7. 按照6000個(gè)細(xì)胞/cm2的密度來(lái)接種細(xì)胞。
8. 加足夠的間充質(zhì)干細(xì)胞的完全培養(yǎng)液，在37℃，5％ CO2和 相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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