一步法支原體檢測試劑盒 50T 現(xiàn)貨
- 發(fā)布日期： 2021-06-15
- 更新日期： 2024-08-24
產(chǎn)品詳請
| 產(chǎn)地 |
美國
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| 品牌 |
CLARK Bioscience
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| 貨號 |
T102
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| 用途 |
支原體檢測
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| 包裝規(guī)格 |
50次/份
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| 純度 |
＞95%%
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| 是否進口 |
是
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產(chǎn)品品名：一步法支原體檢測試劑盒 50T 現(xiàn)貨
產(chǎn)品型號：T102
產(chǎn)品規(guī)格： 50次/份
產(chǎn)品商標(biāo)：美國CLARK Bioscience
產(chǎn)品簡介：
一步式 Quickcolor 支原體檢測試劑盒旨在檢測細胞培養(yǎng)基或其他液體樣品中的支原體。支原體污染是細胞培養(yǎng)人員頭疼的問題。支原體是一種小而簡單的細菌，沒有細胞壁，是最普遍和最嚴(yán)重的細胞系污染源之一。即使在密度高達 107-9 個細胞/mL 的情況下，支原體污染也是不可見的，濁度或 pH 值沒有明顯變化。
事實上，細胞培養(yǎng)研究中最常見的支原體感染源是另一種先前被感染的培養(yǎng)物帶入實驗室。另一個主要來源是實驗室工作人員，因為人類支原體仍然是細胞培養(yǎng)中支原體感染的主要來源。
支原體是一個問題，因為它們會導(dǎo)致細胞培養(yǎng)物發(fā)生變化，包括生長速率改變、形態(tài)變化、染色體畸變和細胞代謝改變。事實上，一個被支原體污染的細胞系由于其特性的改變而被視為不同的細胞系。
建議所有進行細胞培養(yǎng)的實驗室定期檢測支原體污染。有多種支原體檢測可用，每種檢測都有自己的優(yōu)點和缺點。建議將三種方法（培養(yǎng)試驗、DNA 染色和 PCR）結(jié)合用于常規(guī)檢測，確保在體外不生長的支原體菌株可以通過 DNA 染色和 PCR 檢測。
培養(yǎng)測試最敏感，幾乎可以檢測所有物種。然而，細胞培養(yǎng)基中存在的主要支原體之一，豬鼻支原體，無法通過培養(yǎng)方法檢測到。此外，獲得結(jié)果需要一個月的時間，所需的培養(yǎng)基復(fù)雜，保質(zhì)期相對較短，必須包括活的陽性對照。
Hoechst 染色是一種通用的 DNA 染色，對支原體沒有特異性。但對結(jié)果的解釋可能存在問題。
PCR 提供了一種檢測支原體的快速、相對高通過的方法。它既相對具有成本效益，又需要最少的培訓(xùn)。
使用無支原體污染的經(jīng)過驗證的細胞系是在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域生成穩(wěn)健、可靠和可重復(fù)數(shù)據(jù)的先決條件。截至 2013 年年中，提交給 Nature 期刊的手稿必須附有可重復(fù)性檢查表，其中一項要求研究人員提供支原體污染檢測證明。
一步法Quickcolor支原體檢測試劑盒簡單快捷，一小時內(nèi)出結(jié)果。基于特殊的等溫RCA（滾環(huán)放大），反應(yīng)甚至可以在水浴中進行。陽性反應(yīng)可以很容易地通過顏色從粉紅色變?yōu)樗{綠色來指示，這可以用肉眼判斷。
該試劑盒可以檢測多種支原體（例如 M. Hyorhinis，M. Fermentans，M. Arginini，M. Hominis，M. Orale，M. Salivarium，M. Pirum，Aholeplasma Laidlawii，M. Agalactiae，M. Bovis， M. Buccale，M. Arthritidis，M. Pulmonis ) 具有極高的靈敏度和特異性。上述七種支原體占細胞培養(yǎng)中支原體污染的 98% 以上。
儲存和穩(wěn)定性：
產(chǎn)品在 4 ℃ 下運輸。收到后將所有組件儲存在-20 ℃。在這些條件下，產(chǎn)品至少可以穩(wěn)定兩年。
套件組件：
1.Solution 1: 1150 μL (50 Test)
2.Solution 2: 50 μL (50 Test)
3.煮沸支原體DNA：50 μL
4.礦物油：1500 μL
使用程序：
1.樣品制備：
細胞系在檢測前應(yīng)預(yù)培養(yǎng)至少 3 天。樣品應(yīng)來自融合度為 70-90% 的培養(yǎng)物。細胞培養(yǎng)上清液可以直接檢測。
2.反應(yīng)系統(tǒng)設(shè)置：
(1)總反應(yīng)體積為25 μL。建議進行陽性和陰性對照反應(yīng)。在室溫或 37 ℃下解凍溶液 1 并充分混合。溶液 2 應(yīng)始終保存在 -20 ℃。根據(jù)表 1 設(shè)置反應(yīng)系統(tǒng)。
(2) 移液數(shù)次混合，每 0.2 mL PCR 管中加入 24 μL。
(3)在陽性對照管中加入1 μL支原體DNA，在試管中加入1 μL細胞培養(yǎng)上清液。
反應(yīng)：選擇以下反應(yīng)方法之一：
(1)在水浴上反應(yīng)。向每個管中加入 25 μL 礦物油以防止水分蒸發(fā)，并將管置于 61°C 的水浴中 60 分鐘。
(2)在熱循環(huán)儀PCR儀上反應(yīng)。由于一般水浴溫差較大，如果有PCR儀，請在PCR儀上進行反應(yīng)。如果 PCR 儀的蓋子可以設(shè)置為 100°C，則不需要在每個管中添加礦物油。PCR 儀設(shè)置如下：61 ℃，60 min；10 ℃，∞；蓋子，100 ℃。
3.結(jié)果分析：反應(yīng)后，如果反應(yīng)管的溶液顏色為紫紅色，則說明試樣中沒有支原體存在。如果反應(yīng)管的溶液顏色為藍綠色，則表明測試樣品被支原體污染
實驗筆記：
. 如果反應(yīng)在水浴中進行，請使用水銀溫度計確保溫度準(zhǔn)確。
. 61°C 下的反應(yīng)時間不應(yīng)超過 65 分鐘。
. 反應(yīng)結(jié)束后，請勿打開反應(yīng)管。
