產(chǎn)地 | 美國 |
保存條件 | 90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲存 |
品牌 | ATCC |
貨號 | CRL-2151 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
是否是腫瘤細胞 | 是 |
品系 | 未知 |
生長狀態(tài) | 貼壁生長 |
物種來源 | 小鼠 |
純度 | % |
是否進口 | 是 |
品名:ATCC CRL-2151 小鼠腺泡癌細胞
貨號:CRL-2151
產(chǎn)品信息:
存儲人: GH Swift安全等級: 2
產(chǎn)品應(yīng)用:
該細胞用于轉(zhuǎn)染研究。
培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟
對于貼壁培養(yǎng)的細胞,寄送前,我們會將培養(yǎng)基充滿整個培
養(yǎng)瓶,以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細胞的脫落。
1. 收到細胞產(chǎn)品后,請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置
顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程
中存在顛簸,且有些細胞對溫度變化也很敏感,可能存在一些
細胞脫落漂浮的情況,這些細胞仍是活細胞,請勿丟棄,可離
心富集后傳代使用。
2. 對于貼壁培養(yǎng)的細胞,在生物安全柜環(huán)境中,用真空泵去除
培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基,至剩余5-8mL左右,隨后將細胞置于
含有5% CO 的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)
瓶,請立即傳代。
3. 對于懸浮培養(yǎng)的細胞,在生物安全柜環(huán)境中,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中
的細胞至離心管中,離心200×g / 5 - 10 min,去除上清后,用5 mL
培養(yǎng)基吹散細胞,轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,隨后置于含有5% CO
的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存細胞操作步驟
注意:為保存細胞的高存活率,請收到產(chǎn)品后,立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動,迅速解凍。為避免污染,
確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用 70%酒精噴拭凍存
管表面。從此步開始,后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中, 離心
200×g / 5 - 10 min,用真空泵去除含有凍存液的上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證
細胞復(fù)蘇的存活率,請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細胞置于含有
5%CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細胞傳代培養(yǎng)
1. 1.吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基。
2. 加入 1.0 mL 0.25(w/v)Trypsin-0.53mM EDTA溶液,并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育,直至細胞從壁上脫落分離。
222.此過程大約需要3至5分鐘(此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積,可根據(jù)實際情況增減用量)。
3、加入2mL完全培養(yǎng)基中和yi dan bai mei,并輕輕吹打?qū)⒓毎麖呐囵B(yǎng)瓶表面吹落,并使細胞分散。
4、離心200x g/5 min,去除上清后,取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸, 取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中,并加入新鮮細胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。
5、將細胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6、傳代比例:建議 1:2 至 1:3。
7、培養(yǎng)基換液: 每隔 2至 3天。
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問 題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);
4. 靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細胞匯合度80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6.該細胞僅供科研使用。
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