蛋白純化的目的是將目標(biāo)蛋白質(zhì)從細(xì)胞裂解液的全部組分中分離出來,同時(shí)仍保留蛋白的生物學(xué)活性及化學(xué)完整性。蛋白質(zhì)的分離和提純工作是一項(xiàng)艱巨而繁重的任務(wù),需根據(jù)蛋白的特性選擇合適的純化方法來提高獲得的蛋白制品的純度。
三、離心
01速率區(qū)帶離心法:
實(shí)驗(yàn)原理:根據(jù)分離的粒子在離心力作用下,因其在梯度液中沉降速度的不同,離心后具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi),形成幾條分開的樣品區(qū)帶,達(dá)到彼此分離的目的。
由于此法是一種不完全的沉降,沉降受物質(zhì)本身大小的影響較大,一般是應(yīng)用在物質(zhì)大小相異而密度相同的情況。容量小,只能用于少量的制備。
02差速離心法:
實(shí)驗(yàn)原理:利用樣品中各組分沉降系數(shù)的差異,對(duì)不同的微粒施以不同的離心力,經(jīng)過多次離心,離心速度逐步加大,將不同的微粒依次沉降,從而實(shí)現(xiàn)離心分離
01超濾法:
是利用加壓膜分離技術(shù),在一定的壓力下,使小分子溶質(zhì)和溶劑穿過一定孔徑的特制薄膜,大分子溶質(zhì)滯留,從而使大分子物質(zhì)得到部分的純化。常和離子交換,凝膠過濾聯(lián)合使用。
02透析;
是利用小分子經(jīng)過半透膜擴(kuò)散到水( 或緩沖液) 的原理,將無機(jī)鹽等小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術(shù),常和鹽析,鹽溶等方法聯(lián)合使用。