蛋白質(zhì)是成分高度復(fù)雜的，復(fù)雜的生物大分子包括1個(gè)或多個(gè)長鏈氨基酸. 蛋白或肽折疊形成二級和三級結(jié)構(gòu)， 和其他蛋白亞基相互作用來形
成四級結(jié)構(gòu)。蛋白是在結(jié)構(gòu)上彼此不同的同時(shí)出于穩(wěn)定性和活性的目的要求不同的周邊環(huán)境. 蛋白當(dāng)脫離他們天然的環(huán)境后是非常容易降解，變性
和沉淀的。
在蛋白抽提過程中，細(xì)胞和細(xì)胞器膜是被破壞掉從而釋放蛋白到溶液中使蛋白高度不穩(wěn)定. 蛋白是暴露在溶液中不同的PH值，離子強(qiáng)度，溫度
和蛋白酶中. 盡管所有的蛋白是不同的他們要求不同的參數(shù)比如穩(wěn)定性，溶解性和活性, 然而一些因素如果處理好的話可以保證最大程度上的活性蛋
白的抽提，能夠在蛋白抽提過程中保護(hù)蛋白的組分或者因素如下:
緩沖液組分: 在蛋白抽提過程中為蛋白提供適宜的緩沖液環(huán)境是非常重要的，這樣蛋白可以應(yīng)付突然變化的PH值。如果蛋白抽提裂解緩沖液不
是蛋白適宜的緩沖液蛋白會很容易發(fā)生不可逆的變性。
一個(gè)好的蛋白抽提緩沖液必須在要求的PH值下有很強(qiáng)的緩沖能力，水溶性，化學(xué)穩(wěn)定性，和加到蛋白抽提溶液中的其他添加物的兼容性，以及
蛋白下游應(yīng)用的兼容性。
大部分常規(guī)使用的生物緩沖液有 pKa 大約 7因此可以用于生理PH值下。 最常用的生物緩沖液的是磷酸鹽，Tris, MOPS 和HEPES. 這些緩沖液通
常使用在 20 mM濃度以上來保證足夠的緩沖能力.
抽提時(shí)的溫度: 來自于哺乳動物細(xì)胞的蛋白有最適合于他們活性的溫度大約 37 °C以及許多來自于生長在37°C細(xì)菌的細(xì)菌蛋白也有蛋白穩(wěn)定性
的最適溫度在37°C。鑒于此，我們可以預(yù)計(jì)成功的蛋白抽提在室溫進(jìn)行。然而溶液中的蛋白在室溫中會發(fā)生降解因?yàn)槿芤褐械鞍椎沫h(huán)境和細(xì)胞中的
環(huán)境是不同的。溶液中蛋白沒有受到如同細(xì)胞中伴侶的保護(hù)。除此之外蛋白由于存在于溶液中的內(nèi)源蛋白酶從而容易發(fā)生降解。細(xì)胞中的內(nèi)源蛋白
酶在細(xì)胞中存在特定的小室中因此不能降解所有的細(xì)胞蛋白。蛋白酶的活性在 4°C 時(shí)會減弱通常來說蛋白的抽提應(yīng)該在冰上進(jìn)行從而得到活性蛋
白。
細(xì)胞裂解和蛋白抽提緩沖液的添加劑: 有一些可以添加到蛋白抽提緩沖液中的添加劑，一些是通用的，一些是和需要抽提的蛋白特定的.
鹽: 鹽類加入用來維持蛋白抽提溶液的離子強(qiáng)度. 加入的抽提緩沖液中的鹽的濃度基于蛋白生理環(huán)境下的離子強(qiáng)度。太高或太低濃度的鹽會導(dǎo)致蛋白
的沉淀或變性。絕大多數(shù)用于維持蛋白抽提緩沖液中離子強(qiáng)度的常規(guī)使用的鹽包括氯化鈉，氯化鉀或硫酸銨。
蛋白酶/肽酶: 蛋白酶和肽酶是可以在特定位點(diǎn)切割蛋白從而降解他們。有四種已知蛋白類別的蛋白酶包括絲氨酸蛋白酶， 半胱氨酸蛋白酶, 天
冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶. 當(dāng)?shù)鞍锥皇堑鞍酌感枰怀樘峥梢约尤氲鞍酌敢种苿﹣硪种频鞍椎慕到?/span>。特定蛋白酶抑制劑和蛋白酶抑制劑混合物
取決于科研人員的需要有商品化的產(chǎn)品。使用蛋白酶抑制劑混合物是不錯(cuò)的選擇因?yàn)槿藗儗τ诩?xì)胞中存在哪些內(nèi)源蛋白酶的了解是有限的。金屬蛋
白酶被金屬螯合劑所抑制比如EDTA 和EGTA. 最常規(guī)使用的蛋白酶抑制劑是EDTA, PMSF, 亮肽素和 pepstatin A.
滲透調(diào)節(jié)物質(zhì): 滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)是影響的滲透的化合物. 滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)可以協(xié)助蛋白的折疊。 他們是作為添加劑來增強(qiáng)蛋白在溶液中的可溶性和
穩(wěn)定性。在蛋白抽提過程中最常使用的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)包括甘油, 去污劑比如 NP40和糖類如葡萄糖,蔗糖等.
還原劑: 還原劑可以保護(hù)蛋白免受氧化的損害. 當(dāng)抽提特定性的蛋白時(shí)可以使用還原劑，這些蛋白易于發(fā)生氧化損害。還原劑包括 2-巰基乙醇,
DTT 等.
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