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單細(xì)胞文庫構(gòu)建介紹
瀏覽次數(shù):3發(fā)布日期:2020-10-10
     


PicoPLEX DNA-seq Kit
· 高再現(xiàn)性:拷貝數(shù)變異(CNV)及染色體異倍性檢測(cè)重復(fù)性高
       · 完整的文庫構(gòu)建試劑:包含所有文庫構(gòu)建所需試劑
       · 簡(jiǎn)便的工作流程:從單細(xì)胞到測(cè)序可用文庫僅需三步
       · 快速:3小時(shí)內(nèi)完成Illumina NGS文庫構(gòu)建
       · 低污染、低錯(cuò)誤發(fā)生率:?jiǎn)喂軆?nèi)完成文庫構(gòu)建,無需轉(zhuǎn)移
     

■ 產(chǎn)品說明:
PicoPLEX 技術(shù)過去常結(jié)合基因芯片技術(shù)用于檢測(cè)單細(xì)胞層面基因拷貝數(shù)變異,現(xiàn)在可以在單管中構(gòu)建Illumina NGS分析的文庫。PicoPLEX? WGA在全球被IVF行業(yè)供應(yīng)商信賴并用于胚胎植入前遺傳學(xué)篩查和診斷(PGS/PGD)。
       PicoPLEX DNA-Seq Kit簡(jiǎn)化了文庫制備的過程;整個(gè)制備過程可在單管或單孔中完成,降低了錯(cuò)誤和樣品污染的概率,加速了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,并且削減了實(shí)驗(yàn)成本。PicoPLEX? DNA-Seq Kit具有48次反應(yīng)規(guī)格,具備完整的48個(gè)單獨(dú)細(xì)胞或DNA(6 pg至60 pg)起始的NGS文庫構(gòu)建試劑,包括dual Barcodes。單微孔板中含有Barcoding Oligonucleotides。
     

圖1. PicoPLEX  技術(shù)概要
     

圖2. PicoPLEX DNA-seq測(cè)序工作流程。用于Illumina NGS平臺(tái)測(cè)序文庫構(gòu)建的主要步驟,其中PCR板可用單管代替。
     

圖3. 染色體異倍性分析的重復(fù)性。經(jīng)流式細(xì)胞儀分選出11個(gè)不同步的H929細(xì)胞,使用本試劑盒制備文庫后,經(jīng)MiSeq測(cè)序,將獲得的35個(gè)base single-end reads比對(duì)到人類基因組,對(duì)總計(jì)250,000 reads進(jìn)行分析,各細(xì)胞得到的結(jié)果相同,顯示了很高的重現(xiàn)性。
     

圖4. NGS與Array分析的比較驗(yàn)證。使用同一胚胎單細(xì)胞庫分別進(jìn)行Array和NGS分析,確認(rèn)本制品和24  sure array(Illumina)兩者的等效性。NGS的結(jié)果與Array的結(jié)果一致。測(cè)序結(jié)果顯示:2p檢測(cè)到末端丟失(圖示),12q檢測(cè)到末端增加(數(shù)據(jù)未展示),經(jīng)高分辨率的FISH分析確認(rèn),是與親代DNA漏檢的易位相關(guān)。
       *數(shù)據(jù)來源于Genetics & IVF Institute.      

     

圖5. 無需進(jìn)行文庫定量。采用流式細(xì)胞儀分選的不同步的H929細(xì)胞,使用本試劑盒進(jìn)行文庫構(gòu)建后,Miseq平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。由于本產(chǎn)品高重復(fù)性的特點(diǎn),在文庫pooling前無需進(jìn)行定量。注: 圖中空白的條帶表示該位置處細(xì)胞缺失。

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